High Sensitivity ELISA操作指导

1． 确定需要微孔板的数目。

2． 用洗涤液洗微孔板2次。

3． 稀释标准品：在所有的标准品稀释孔中加入100?l稀释液，吸取100?l标准品加入到第一个孔中，做一个重复孔。混匀后吸取100?l到第二个孔中，逐次吸取。最后一个空弃掉100?l。

4． 加入 100?l样品稀释液作为空白对照，做一个重复孔。

5． 加入50?l 样品稀释液于样品孔中。

6． 加入50?l 样品到样品孔中，最一个重复孔。

7． 加入50?l生物素抗体于所有孔中。

8． 盖上微孔板，室温孵育2小时。

9． 倒掉板中液体，用洗涤液洗微孔板6次。

10． 加入100?l稀释的链霉素于所有孔中。

11． 盖上微孔板，室温孵育1小时。

12． 倒掉板中液体，用洗涤液洗微孔板6次。

13． 加入100?l溶液I于所有孔中。

14． 盖上微孔板，室温孵育15分钟。

15． 倒掉板中液体，用洗涤液洗微孔板6次。

16． 加入100?l溶液II于所有孔中。

17． 盖上微孔板，室温孵育30分钟。

18． 倒掉板中液体，用洗涤液洗微孔板6次。

19． 加入100?l TMB溶液于所有孔中。

20． 室温孵育10-20分钟。

21． 加入100?l终止液于所有孔中。

22． 450nm波长下测定吸光值。