eFluor® 纳米晶体偶联试剂盒

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  • 在显微镜下观察eFluor 纳米晶体偶联抗体处理额切片时需要滤光片信息?
  • 不同荧光所需的最佳滤片:

    eFluor® 纳米晶体发射光激发光滤波器带通宽度双色分光镜发射光滤波器>带宽
    eFluor 525NC 525 460, 425/45, 415/100 505 520/20
    eFluor 565NC 565 460, 425/45, 415/100 470 565/20
    eFluor 605NC 605 460, 425/45, 415/100 470 600/20
    eFluor 625NC 625 460, 425/45, 415/100 470 620/20
    eFluor 650NC 650 460, 425/45, 415/100 470 655/20
  • 我可以使用PAP pen吗?
  • 不可以,我们发现传统的PAP pen 会干扰eFluor 纳米晶体偶联抗体,对实验结果有影响。

  • 哪些缓冲液和洗液适用于eFluor 纳米晶体偶联抗体?
  • 我们建议eFluor 纳米晶体偶联抗体使用pH 7.4 Tris缓冲液(TBS)(Cat. No. 00-4954)进行洗涤,而不建议使用磷酸盐缓冲液(PBS)。

  • 切片染色完成后能够保存多长时间以便于观察?
  • 纳米晶体偶联抗体处理的切片较其他抗体光敏感性强,如果正确封片和保存,切片能够持续观察一月左右。

  • 我应该如何保存切片?
  • 应用透明树脂密封切片,并于2-8°C避光保存。

  • 我应该如何封片?
  • 特别注意:对于需要延长照相时间或eFluor 纳米晶体抗体与有机染料联合使用的实验,在对组织或细胞染色所使用的封片剂中,要含有抗褪色组分。在这种情况下,我们建议使用Vectashield粘片剂。

  • 抗体使用浓度是多少?
  • 胺类和巯基类反应试剂盒中的eFluor 纳米晶体 605和650 偶联抗体的使用浓度在3-6 uM范围内。我们推荐其他抗体用于ICC和IHC使用浓度为1-40 nM,但是最佳浓度需要预实验确定。

  • eFluor® 纳米晶体偶联抗体是否会对显色造成干扰?
  • eFluor纳米晶体偶联抗体对免疫组织化学显色没有影响。

  • 我的染色过程正常,随后用二抗孵育,但eFluor®纳米晶体偶联抗体结果不好,可能是什么问题?
  • 虽然操作过程中有两步法或三步法染色,但在用eFluor 纳米晶体 偶联抗体染色时要根据情况做适当调整,需要注意以下几点:
    1 尽量按照我们推荐的实验方案操作,因为这个方案是技术部多次验证的最佳方案。
    2 封闭液—我们有两个配方:高蛋白浓度和低蛋白浓度。
    对细胞骨架蛋白、细胞质蛋白和细胞膜蛋白进行染色时,我们建议用低蛋白浓度封闭缓冲液(Cat. No. 00-4953);如果为了提高特异性和更好的信噪比,我们建议用高蛋白封闭缓冲液(Cat. No. 00-4952),特别是在对核抗原和石蜡包埋组织染色时能得到更好的结果。
    3 孵育时间—我们建议在封闭非特异性位点时室温孵育1 h,eFluor 纳米晶体偶联抗体(用封闭液稀释)在2-8°C、避光下孵育过夜。
    4 封片剂—请参阅下表选择合适的封片剂。

    推荐使用的试剂应用方法
    细胞(ICC) Fluoromount G (Cat. No. 00-4958)
    冰冻切片 Fluoromount G (Cat. No. 00-4958)
    福尔马林固定石蜡包埋 Fluoromount G or TBS (Cat. No. 00-4958)
  • 对细胞和组织进行免疫荧光染色时,实验方案是否有变化?
  • 不同用途方案也不一样,请参考莱兹生物网站“实验方案”推荐的相关实验方案。