TGF-β介绍
转化生长因子-β1(TGF-β1)是一种25kDa、通过二硫键连接而形成同源二聚体蛋白。该蛋白在很多关键的发育、免疫和稳态过程均有参与。该分子作为一种390个氨基酸的前体合成,其包含23个氨基酸的信号肽、255个氨基酸的前区和112个氨基酸的成熟片段区。该分子的后加工有一套非常复杂的流程,通常会以一种被隐藏的形式分泌。分子在释放之前,信号序列被割,然后其前区被糖基化。糖基化还会出现甘露糖-6磷酸残基的异常结合。随后是在以皮肤蛋白转化酶的介导下进行切割,产生一个80kDa、通过二硫键连接的前区(称为LAP,用于隐藏相关蛋白)和25kDa二硫化物键连接的成熟片段(称为TGF-β1)。这两种独立的二硫键连接多肽以非共价相互作用结合,使TGF-β1失去活性。尽管这种80K/25K蛋白复合物可以直接分泌,但效
率很低。为了促进分泌和细胞外储存,另一种被称为LTBP、分子量为200kDa的蛋白通过共价键连接到两条LAP多肽链之一的N端。促进分泌和随后的细胞外基质储存。分泌后,TGF-β1通过LTBP与细胞外基质共价连接。这种复合物随后被蛋白酶切割并释放,暴露出LAP上的甘露糖残基。这导致活性的二聚体TGF-β1的释放。成熟小鼠与大鼠和棉鼠TGF–β1具有100%的氨基酸序列一致,与人、犬和猪具有99%的氨基酸序列一致,与豚鼠有97%的氨基酸序列一致。成熟小鼠的TGF-β1与TGF-β2、β3的氨基酸序列同源性分别为72%和78%。据推测,暴露的LAP甘露糖残基能够与细胞表面IGF-II受体结合,游离的IGF-II受体竞争性破坏LAP-TGF-β1复合物。
试剂盒组成:
预包被抗TGF-β1单克隆抗体的微孔板
冻干TGF-β1标准品
50×生物素偶联抗TGF-β1检测抗体
50×链霉亲和素-HRP
5×通用稀释液
1×TGF样品活化指示液A
1×TGF样本活化指示液B
20×清洗缓冲液
TMB底物
1×终止液
封板膜
试剂盒贮存
将试剂盒试剂储存在2至8℃之间,如长期存放请在标签上注明的试剂盒和试剂的有效期内使用。试剂盒只有在正确储存条件下,才能保证试(>3个月)需将冻干质控品储存在-20℃以下。
使用后,剩余试剂应立即放回冰箱。
请在标签上注明的试剂盒和试剂的有效期内使用。试剂盒只有在正确储存条件下,才能保证试剂盒成分的有效期。
重复使用时避免试剂之间交叉污染。试剂间的污染会造成试剂盒失效。
适用样本与样本处理
该试剂盒适用于细胞培养上清、血清、血浆等样本的分析。样本检测前需提前活化样本,具体步骤参考说明书P6。
对于血液样本,应当尽快将血清或血浆分离。样品中出现沉淀时,需先将沉淀分离后再行分析。避免使用严重溶血或血脂异常的样本。
大量的样本应先分装后,置于-20℃下冷冻保存,以避免TGF-β1的活性损失。如果样品在24小时内分析,可先储存在2~8℃。样品应避免反复冻融。冷冻样品分析前,应缓慢升至室温,并轻轻混合。禁止在37℃的水浴中解冻样品。请勿涡旋或剧烈搅动样品。
本试剂盒仅供研究使用,不可用于诊断!
Research use only, not for diagnostic use!