高灵敏细胞因子服务检测服务发表时间:2024-04-24 13:13 ProQuantum检测利用基于邻位连接测定(PLA™)技术,为分析物提供了抗体-抗原结合特异性以及qPCR信号检测和扩增功能,实现了高灵敏度检测。与传统方法相比,ProQuantum 检测通常还可以以较低的样品量检测低水平蛋白。
使用一对配对的靶标特异性抗体,每个抗体与引物偶联。该平台结合了Applied Biosystems TaqMan实时荧光定量PCR技术的灵敏度和较宽的动态范围。在抗体与分析物结合过程中,两个DNA寡核苷酸紧密靠近,允许两条链连接,随后产生用于扩增的模板链。每个试剂盒中提供两种抗体偶联物:3’端引物和5’端引物,各别与两个靶标特异性抗体偶联。当抗体对与蛋白质的两个不同表位结合时,3’和5’引物会彼此接近。只有当抗体对与蛋白结合时(A), 对应的2端引物才能与互补的夹板引物结合,并随后通过DNA连接酶彼此连接 (B) 引物连接后,通过95°C热灭活使连接酶、抗体和其他蛋白质变性,仅留下100个碱基的链接引物,其浓度与第一阶段抗体-蛋白结合的水平相应。将该链接引物使用TaqMan检测试剂盒进行40个qPCR循环的扩增信号。
检测运行可在2小时内完成。首先进行孵育步骤,使抗体与靶标分析物结合,孵育时间1小时。第二步是添加qPCR反应预混液,并将检测板放入qPCR仪器进行连接酶反应及qPCR扩增读板。 检测靶点 |