检测TGF-β,你的样本活化对了吗?发表时间:2023-04-25 23:12 检测TGF-β,你的样本活化对了吗? 转化生长因子β(Transforming growth factor-beta,TGF-β)最初发现是因为它能刺激大鼠成纤维细胞株的生长。自从TGF-β1被发现以来,已有超过30个TGF-β超家族成员被鉴定和表征。TGF-β超家族分为TGF-β和骨形态发生蛋白(BMP)亚家族。哺乳动物中存在三种高度同源的TGF-β亚型,即TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3。其中TGFβ1在免疫调节中发挥主要作用,TGFβ2和TGFβ3在其他细胞环境中发挥作用,包括纤维化。 ![]() 图1活性TGF-β的合成和释放过程。只有当TGF-β从复合物中释放出来时,它们才能发挥功能。 TGF-β作为一种非活性前体合成的蛋白,需要活化才能发挥作用。TGF-β前体由三部分组成:一个信号肽,一个称为潜伏相关肽(LAP)的N端长前体,以及C端对应于成熟细胞因子的短片段。在Furin内切酶剪切后,二硫键连接的TGF-β1同源二聚体与二硫键连接的LAP同源二聚体再通过二硫键连接,从而形成被称为小的潜伏复合物(small latent complexes,SLC)。SLC通过二硫键与潜在的TGF-β结合蛋白(LTBP)交联,形成大潜伏复合物(e large latent complex,LLC),与细胞外基质(ECM)中的纤维蛋白相互作用,使潜伏的TGF-β稳定储存而不是进一步被激活。只有从潜伏复合物中释放出来,TGF-β才能具有活性并激活其受体。 TGF-β信号通路参与细胞生长、分化、凋亡、运动和侵袭、细胞外基质 (ECM) 产生等。尽管 TGFβs 通常受到动态调节并参与维持组织内环境平衡,但在疾病状态 (包括癌症、纤维化和炎症) 中,TGFβs 通常长期过度表达,并通过调节细胞生长、迁移等来驱动疾病进展。因此,TGFβ信号通路已成为药物开发的一个热门靶点。 体外通过免疫学方法检测活性TGFβ(包括TGFβ1、TGFβ2、TGFβ3)通常需要将样本通过酸处理,再用碱中和完成TGFβ活化。但是中和后pH需要处于7.2-7.6之间,才能保证后续的检测准确性。 由于样本体系小,无法准确测量pH, 使得TGFβ样本活化出现以下问题: ① 由于酸碱试剂配置有误或失效 ② 酸碱使用比例不合适 这些会导致样本偏酸性或过碱性,最终引起样本无值或结果不准确。 莱兹生物积累多年检测经验,特别推出市面上独有的TGF-β 样本活化指示剂(LEA-9999-TGFB),其中活化液A呈淡橘色,活化液B呈淡蓝色,当中和pH达到7.2,会迅速出现肉眼可辨的颜色变化。
参照ELISA或多因子说明书中的酸碱使用量,我们推荐活化液A和B等体积使用。 ![]() 加入活化液A室温孵育10min后,再加入等体积的活化液B,当样本达到中和后,会立即出现明显的颜色变化(受样本本身颜色的影响,会呈现蓝色或偏紫色),此时表明样本已经活化、中和完成,可以继续进行后续的ELISA或多因子检测。如果未变色,表明样本仍处于酸性环境下,需要继续少量滴加活化液B直至变色。 该指示剂在不影响试剂盒检测性能的前提下,真正实现了TGF-β样本活化的可视化,为TGFβ准确检测保驾护航。 优势: 1 迅速精准指示样本活化完成。真正实现样本活化完成判断的可视化。 2 试剂通用性高。可搭配市售TGFβ ELISA及多因子试剂使用。 新品免费试用,数量有限,请扫描下方二维码申请
END ![]() |