表面染色流程-TONBO

试剂准备:

• 流式染色缓冲液 (Flow Cytometry Staining Buffer) :产品编号TNB-4222-L500

• 12x75 mm 圆底流式管或 96孔圆底微孔板

染色流程:

1. 制备单细胞悬浮液，用流式染色缓冲液调整浓度至2 x 10 ⁷- 2   x 10 ⁸ cells/mL。

2. 每管（或孔）加50 µL 细胞悬浮液。

3. 加推荐量的抗体到样品里，细胞悬浮液+抗体的最终体积不应超过100µL。

4. 4°C避光孵育20-­60分钟。

5. 用200­-300 µL (微孔板) 或 1­2 mL (管) 染色缓冲液洗细胞.

6. 300-­400 x g室温离心5分钟，弃掉上清液。短暂涡旋重悬细胞。

7. 如果不需要加二抗，直接调到第10步 。

8. 如果二抗是纯化抗体或生物素偶联抗体，加100 µL 稀释好的抗体到管里。

9. 4°C避光孵育20-60分钟。

10. 300­-400 x g室温离心5f分钟，弃掉上清液。短暂涡旋重悬细胞。

11. 每管加入适当的染色缓冲液重悬细胞，上机检测或进行胞内染色。