中和实验

抗体中和细胞因子诱导指示细胞增殖

1、材料
指示细胞系:见速查表。
培养基:RPMI1640+10%FBS。
检测培养基:RPMI1640+2%FBS。
96孔板(平底)(Costar Cat.No.3595)
MTT溶液:(Sigma Cat. No. M5655)5mg/ml 储液(PBS稀释),室温避光保存。
MTT裂解液:20%SDS或50%DMF。

2、仪器
吸管和移液器
恒湿培养箱
96孔微孔检测分光光度计

3、实验持续时间
孵育时间24-48小时
测定样品准备时间1小时

4、实验方案
(1)向96孔板每孔中加50ul检测培养基。
(2)使用两倍的连续稀释液从第3排到第12排依次稀释功能级别的抗细胞因子抗体,留1和2排不加,作为对照。
(3)2排到12排每孔加50ul重组细胞因子和样品(浓度见速查表,第二排是细胞因子和指示细胞组),1排是只有细胞的对照组。
(4)37度 5%CO2 恒湿培养箱培养2小时。
(5)1640培养基洗指示细胞三次,检测培养基重悬调整细胞浓度到2-3.5×105/ml(见速查表)。
(6)每孔加100ul细胞悬液。
(7)37度 5%CO2 恒湿培养箱培养24-48小时。
(8)每孔加10ul MTT溶液(5mg/ml),孵育4小时。
(9)每孔加50ul MTT 裂解液,孵育过夜。
(10)570-650nm 读板。
(11)绘制标准曲线分析数据。

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