1、ELISPOT检测比ELISA优越性在哪里？

ELISPOT比ELISA灵敏度高。ELISPOT不仅能分析细胞因子分泌的总量变化，更能检测活化淋巴细胞的数量变化。 ELISPOT可精确到检测出一百万个淋巴细胞中的一个活化细胞的细胞因子分泌。

2、ELISPOT适用于哪些细胞的检测？

理论上讲，所有能分泌细胞因子的细胞都可以用ELISPOT进行检测分析。实际应用中常见的检测细胞类型包括：外周血淋巴细胞（PBMC）、骨髓、或者中枢神经系统和淋巴组织的单细胞悬液。

3、我现在的进行的试验是疫苗研究（或者任何别的免疫学研究），我能用ELISPOT来帮助我的试验进程吗？

ELISPOT是一个崭新的技术平台，它适用于多种免疫学研究的精确分析。对于疫苗研究，中国药品生物制品检定所在《预防用DNA疫苗临床前研究技术指导原则》及《预防用以病毒为载体的活疫苗制剂的技术指标原则》等规定中均指出，ELISPOT是检测和评价疫苗的细胞免疫的有效方法。

4、提取外周血淋巴细胞时，有那些注意事项？

如果取外周血淋巴细胞（PBMC） 进行ELISPOT检测，最好采用新鲜血液。在保证无菌操作的前提下，首先应保证取血时抗凝剂应及时充分的与血液混匀，避免血凝块的出现。抗凝血最好及时提取PBMC，避免放置时间过长，室温下避免过夜。应选用分离效果好的淋巴细胞分离液，避免PBMC中混有过多其他细胞成分或杂质。

5、在分离外周血淋巴细胞时，发生了溶血，会影响我的试验结果吗？

外周血出现溶血后，在使用淋巴细胞分离液分离PBMC时，溶血产生的细胞碎片、血红素等杂质将极大可能悬浮于分离液的层面，在吸取PBMC时非常容易混入这些杂质，由于混入细胞的细胞碎片和血红素很难清洗去除，在进行ELISPOT实验时，有可能沉积在培养板底，严重影响细胞因子和抗体的结合，进而影响实验结果。

6、采用什么方法分离外周血淋巴细胞适合于ELISPOT试验？

使用淋巴细胞分离液，推荐使用进口淋巴细胞分离液，如：Lymphoprep，或者NycoPrep 1.077（无寡糖）。避免使用红细胞裂解液分离淋巴细胞。

7、从动物脾脏组织分离淋巴细胞应如何操作？

取动物脾脏组织时，应注意取材的无菌操作。分离出脾脏组织，研磨后过200目筛网，保证所分离的细胞为单个细胞悬液。获得细胞悬液后应该使用相应的淋巴细胞分离液进一步分离单个核细胞。

8、对淋巴细胞进行：体外刺激预孵育、或板内同步刺激培养应如何操作？

（1）将抗原和淋巴细胞在体外混合，刺激并预孵育，是通用的方法。预孵育的淋巴细胞，在置入ELISPOT板之前应使用复温到37℃的培养液清洗细胞1-2次。置入ELISPOT板以后通常在37℃培养5～6小时。
（2）对于高度特异性抗原，可以采用将淋巴细胞和抗原同时加入ELISPOT板孔中，37℃培养箱中，同步进行刺激、培养、和细胞因子捕获。淋巴细胞板内同步刺激培养的时间通常为22～24小时。