如何选择流式荧光

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  • 紫色激光器荧光染料 - 405 nm 激发
  • 名称激发光波长(nm)发射光波峰(nm)相对强度(1 =最低,5 =最高)用途和用法
    eFluor® 605NC 405 605 2 紫光激光器激发
    可以完好的替代 Pacific Orange®.
    eFluor® 605NC 可以与 eFluor® 450联合使用
    适用于丰度较高的抗原
    eFluor® 625NC 405 625 2 紫光激光器激发
    eFluor® 625NC 可以与 eFluor® 450联合使用
    适用于丰度较高的抗原
    eFluor® 650NC 405 650 3 紫光激光器激发
    eFluor® 650NC 可以与 eFluor® 450联合使用
    适用于丰度较高的抗原
    eFluor® 450 405 450 2 紫光激光器激发
    eFluor® 450 可以与 Pacific Blue®交替使用
    能与 eFluor® 605NC 或 eFluor® 625NC一起使用
    适用于丰度较高的抗原
    Alexa Fluor® 405
    (eBioscience无该荧光抗体)
    405 421 1 紫光激光器可以激发很弱的荧光
    只适用于高丰度的抗原
    Pacific Blue®
    (eBioscience无该荧光抗体)
    405 455 2 紫光激光器激发
    Pacific Blue® 可以与 eFluor® 450交替使用
    典型的弱荧光基团
    只适用于高丰度的抗原
    Alexa Fluor® 430 (eBioscience无该荧光抗体) 405 541 1 仅供作为紫光管的备用荧光物质
    Pacific Orange®
    (eBioscience无该荧光抗体)
    405 551 1 只适用于高丰度的抗原
    由于Pacific Orange®发射光波长为551nm可以与 Pacific Blue® 共染进行多色流式细胞分析
    eFluor® 605NC 是荧光较强的替代品
  • 绿色和黄/绿色激光器的荧光染料 -532 - 561 nm 激发
  • 名称激发光波长(nm)发射光波峰(nm)相对强度(1 =Lowest,5 =Highest)用途和用法
    Alexa Fluor® 532 532 561 3 用于配有合适的滤光片通道的流式细胞仪
    光耐受强 并且不依赖于PH值
    是荧光显微镜技术的最佳选择
    R-PE (R-Phycoerythrin) 532 - 561 578 5 多数仪器使用FL2通道检测
    可以产生较高的光量子,适用于表达丰度较低的抗原检测
    易受光萃灭
    PE-Texas Red (eBioscience无该荧光抗体) 532 - 561 615 3 单激光流式细胞仪在FL3通道检测
    PE-Cy5 532 - 561 667 4 多数仪器在FL3或FL4通道检测
    与APC共用时需要调整较大的荧光补偿,所以不建议二者共用
    PE-Cy5.5 532 - 561 695 3 to 4 多数仪器在FL3或FL4通道检测
    能和APC共用,但仍需调补偿,是双激光器流式细胞仪的最佳荧光
    PE-Cy7 532 - 561 785 3 用于配有合适的滤光片通道的流式细胞仪
    与其他荧光共用的时候有微小的干扰,需要微调荧光补偿
  • 蓝光激光器荧光染料 - 488 nm 激发
  • 名称激发光波长(nm)发射光波峰(nm)相对强度(1 =最低,5 =最高)用途和用法
    FITC (Fluorescein Isothiocyanate) 488 518 3 大多数仪器在 FL1 通道检测.
    适用于荧光显微镜技术
    Alexa Fluor® 488 488 519 3 大多数仪器在 FL1 通道检测.
    具有耐光性和PH依赖性
    是荧光显微镜技术的绝佳选择
    R-PE (R-Phycoerythrin) 488 578 5 大多数仪器在 FL2通道检测.
    具有很高的光量子产量,适用于低丰度抗原检测 易淬灭
    PE-Texas Red
    (eBioscience无该荧光产品)
    488 615 3 单激光管FL3通道检测
    PE-Alexa Fluor® 610
    (eBioscience无该荧光产品)
    488 628 3 PE-Texas Red 荧光染料的替代品与PE的荧光补偿较小,对FC介导的非特异性结合较PE-Cy5小.
    PE-Cy5 488 667 4 多数仪器在FL3或者 FL4 通道检测
    当用于双激光器仪器的 APC 通道时需要注意调节激光器之间的荧光补偿
    光淬灭性强,不适用于传统的荧光显微镜技术
    可与FITC,PE搭配,荧光补偿较小;不宜与APC搭配
    PE-Cy5.5 488 695 3 to 4 多数仪器在FL3或者 FL4 通道检测
    光淬灭性强,不适用于传统的荧光显微镜技术
    可与FITC、PE、APC搭配,荧光补偿较小、
    PerCP-Cy5.5 488 695 3 多数仪器在FL3或者 FL4 通道检测
    可与FITC、PE、APC搭配,荧光补偿较小
    量子产量较低,最好用于高丰度抗原的检测
    PerCP-eFluor® 710 488 710 4 多数仪器在FL3 通道检测
    是PerCP-Cy5.5光量子产量的2-3倍
    PE-Cy7 488 785 3 选用合适的滤光片
    BECKMAN用FL4通道检测,BD仪器用FL3通道检测。
    可与FITC、PE、APC搭配,与FITC无重叠,与PE和APC荧光补偿较小
    光淬灭性强,染色处理时要注意避光
    7-AAD 488 647 -- 多数仪器在FL3 通道检测
    能够选择性的与DNA的G-C碱基结合
    用于区分死细胞和活细胞
    Propidium Iodide (PI) 488 617 -- 在FL2 通道检测
    室一种嵌入性核酸荧光染料,可选择性的嵌入DNA和RNA的碱基对中。
    用于区分死细胞和活细胞
    利用PI进行细胞周期分析的时候需要对细胞进行固定和破膜。
  • 红光激光器荧光染料 - 633 nm 激发
  • 名称激发光波长(nm)发射光波峰(nm)相对强度(1 =最低,5 =最高)用途和用法
    APC (Allophycocyanin) 633 660 4 适用于配备氦氖激光器或红色二极管激光器的流式细胞仪,BD仪器在FL4通道检测,Beckman仪器在FL3通道检测
    可代替Cy5 或Alexa Fluor® 647
    eFluor® 660 633 660 4 eFluor® 660 是 Alexa Fluor® 647的替代荧光
    在双激光器仪器的FL4通道检测
    可以替代APC
    光稳定性好,适合于荧光显微镜技术
    Alexa Fluor® 647 633 668 4 在双激光器仪器的FL4通道检测
    可代替Cy5 或Alexa Fluor® 647
    光稳定性好,适合于荧光显微镜技术
    Cy5 633 670 3 在双激光器仪器的FL4通道检测
    可与APC 或Alexa Fluor® 647互换使用
    是胞内染色和荧光显微镜技术的最佳选择
    APC-Cy5.5
    (eBioscience无该荧光抗体)
    633 690 3 选择适合的通道
    多用于四色流式细胞染色
    Alexa Fluor® 700 633 723 2 虽然氦氖激光器不能较好的激发,但是仍会有一定的荧光发射光
    需要选用合适的滤光片
    多数仪器需要 685 LP 反射镜and 710/20 滤波器
    APC-eFluor® 780 633 780 2 需要选用合适的滤光片
    光稳定性较APC-Cy7好。
    APC 分子 与eFluor® 780偶联而成的荧光染料
    APC-Cy7, APC-Alexa Fluor® 750 和 APC-eFluor® 780 可以互换使用。
    APC-Alexa Fluor® 750
    (eBioscience无该荧光抗体)
    633 775 2 需要选用合适的滤光片
    光稳定性较APC-Cy7好。
    APC 分子 与eFluor® 750偶联而成的荧光染料
    A APC-Cy7, APC-Alexa Fluor® 750 和 APC-eFluor® 780 可以互换使用。